ADIÇÃO DE COLESTEROL CARREGADO COM CICLODEXTRINA AO SÊMEN OVINO NA CRIOPRESERVAÇÃO
Schlagworte:
Congelação, crioprotetor, espermatozoidesAbstract
Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoidescongelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg),1,5mg, 3,0mg e 6,0mg of CCC/120 x106sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de 3,0mg de CCCmanteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.
Literaturhinweise
AMIDI, F.; FARSHAD, A.; KHOR, A.K. Effects of cholesterol-loaded cyclodextrin during freezing step of cryopreservation with TCGY extender containing bovine serum albumin on quality of goat spermatozoa. Cryobiology, v.61, n.1, p.94-99, 2010.
AMORIM, E.A.M.; GRAHAM, J.K.; SPIZZIRI, B.; MEYERS, M.; TORRES, C.A.A. Effect of cholesterol or cholesteryl conjugates on the cryosurvival of bull sperm. Cryobiology, v.58, n.2, p.210-214, 2009.
BALL, B.A. Oxidative stress, osmotic stress and apoptosis: Impacts on sperm function and preservation in the horse. Animal Reproduction Science, v.107, n.3-4, p.257-267, 2008.
BANCHERO, M.; RONCHETTI, S.; MANNA, L. Characterization of Ketoprofen/Methyl-β-Cyclodextrin complexes prepared using supercritical carbon dioxide. Journal of Chemistry, v.2013, p.1-8, 2013.
BERNARDINI, A.; HOZBOR, F.; SANCHEZ, E.; FORNÉS, M.W.; ALBERIO, R.H.; CESARI, A. Conserved ram seminal plasma proteins bind to the sperm membrane and repair cryopreservation damage. Theriogenology, v.76, n.3, p.436-447, 2011.
BILODEAU, J.F.; BLANCHETTE, S.; CORMIER, N.; SIRARD, M.A. Reactive oxygen species-mediated loss of bovine sperm motility in egg yolk Tris extender: protection by pyruvate, metal chelators and bovine liver or oviductal fluid catalase. Theriogenology, v.57, n.3, p.1105-1122, 2002.
CBRA - Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 3aed., Belo Horizonte 2013. 104p.
FARSHAD, A.; AMIDI, F.; KOOHI KHOR, A.; RASHIDI A. Effect of cholesterol-loaded cyclodextrin in presence and absence of egg yolk during freezing step on quality of Markhoz Buck´s spermatozoa. Asian-Australasian Journal of Animal Science, v.24, n.2, p.181-189, 2011.
GAGNON, C. Regulation of sperm motility at the axonemal level. Reproduction, Fertility and Development, v.7, p.847-855, 1995.
GRAHAM, J.K.; KUNZE, E.; HAMMERSTEDT, R.H. Analysis of sperm cell viability, acrosomal integrity, and mitochondrial function using flow cytomitry.Biology of Reproduction, v.43, n.1, p.55-64, 1990.
KADIRVEL, G.; KUMAR, S.; KUMARESAN, A.; ATHIRAVAN, P. Capacitation status of fresh and frozen-thawed buffalo spermatozoa in relation to cholesterol level,membrane fluidity and intracellular calcium. Animal Reproduction Science, v.116, n.3-4, p.244–253, 2009.
LEE, Y.S.;LEE, S.; LEE, S.H.;YANG, B.K.; PARK, C.K.Effect of cholesterol-loaded-cyclodextrin on sperm viability and acrosome reaction in boar semen cryopreservation. Animal Reproduction Science,v.159, p.124-30, 2015.
MAO, J.; WU, G.M.; PRATHER, R.S., SMITH, M.F.; CANTLEY, T.; RIEKE, A.; DIDION, B.A.; DAY, B.N. Effect of methyl-β-ciclodextrina treatment of pig spermatozoa on in vitro fertilization and embryo development in the absence or presence of caffeine. Theriogenology, v.64, n.9, p.1913-1927, 2005.
MIKI, K. Energy metabolism and sperm function. Society for Reproduction and Fertility. (Suppl.) v.65, p.309-325, 2007.
MOCÉ, E.; GRAHAM, J.K. In vitro evaluation of sperm quality. Animal Reproduction Science, v.105, n.1-2, p.104-118, 2008.
MORAES, E.A.; GRAHAM, J.K., TORRES, C.A.A., MEYERS, M.; SPIZZIRI, B. Deliveringcholesterolorcholestanoltobullspermmembranes improves cryosurvival. Animal Reproduction Science, v.118, n.2-4, p.148-154, 2010.
MORAES, E.A.; MATOS, W.C.G.; GRAHAM, J.K.; FERRARI JUNIOR, W.D. Cholestanol-loaded-cyclodextrin improve the quality of stallion spermatozoa after cryopreservation. Animal Reproduction Science, v.158, p.19-24, 2015.
MOORE, A.I.; SQUIRES, E.L.; GRAHAM, J.K. Adding cholesterol to the stallion spermplasma membrane improves cryosurvival.Cryobiology, v.51, n.3, p.241–249, 2005.
OGAWA, Y.A.; TANAKA, M. A fluorescent cholesterol analogue for observation of free cholesterol in the plasma membrane of live cells. Analytical Biochemistry, v.492, p.49-55, 2016.
PEÑA, F.J.; ORTEGA-FERRUSOLA, C.; MARTIN, M.P. New flow cytometry approaches in equine andrology. Theriogenology, v.86, n.1, p.366-372. 2016.
PERUMAL, P.; VUPRU, K.; RAJKHOWA. C. Effect of addition of taurine on the liquid storage (5°C) of mithun (Bos frontalis) semen. Veterinaty Medicine International,v.2013, n.4, p.1-7, 2013.
PURDY, P.H.; GRAHAM, J.K. Effect of cholesterol-loaded cyclodextrin on thecryosurvival of bull sperm. Cryobiology, v.48, p.36-45, 2004.
SALMON, V.M.; LECLERC, P.; BAILEY, J.L. Cholesterol-loaded cyclodextrin increases the cholesterol content of goat sperm to improve cold and osmotic resistance and maintain sperm function after cryopreservation. BiologyofReproduction, v.94, n.4, p.85-92, 2016.
SAS.StatisticalAnalysis System 2002-2008: System for Windows, Versão 9.2. SAS Institute Inc., Cary, USA, 2009.
SOUZA, W.L.;MORAES, E.A.;COSTA, J.M.S.; GRAHAM, J.K. Cholesterol-loadedcyclodextrin in freshgoatsperm improves cryosurvival rates. Revista Brasileira de Ciências Veterinárias, v.23, n.1-2, p.93-98, 2016.
SOUZA, W.L.;MORAES, E.A.; OLIVEIRA, R.P. Colesterol carregado pela ciclodextrina sobre a criopreservação dos espermatozoides de garanhões da raça Nordestina. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.38, n.5, p.991-996, 2018.
VISHWANATH, R. Artificial insemination: the state of the art. Theriogenology, v.59, n.2, p.571-584, 2003.
ZENG, W.X.; TERADA, T. Effects ofmethyl-beta-cyclodextrin on cryosurvivalof boar spermatozoa. Journal of Andrology, v.22, p.111–118, 2001.
ZIDOVETZKI, R.; LEVITAN, I. Use of cyclodextrins to manipulate plasma membrane cholesterol content: evidence, misconceptions and control strategies. Biochimica et Biophysica Acta, v.1768, n.6, p.1311-1324, 2007.